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Trizol使用說明書

大小:183 人氣: 2010-05-06 需要積分:3
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貢獻文章:

貢獻資料:

一、分離純化的基本原理
研究基因的表達(dá)和調(diào)控時常常要從組織和細(xì)胞中分離和純化RNA。RNA質(zhì)量的高低常常影響cDNA庫,RT-PCR和Northern Blot等分子生物學(xué)實驗的成敗。Trizol是一種新型總RNA抽提試劑,內(nèi)含異硫氰酸胍等物質(zhì),能迅速破碎細(xì)胞,抑制細(xì)胞釋放出的核酸酶。
二、用戶需自備的試劑和材料
無水乙醇、氯仿、Glycogen(可能需要)、 1.5ml Eppendorf管(RNase-free)、 Tips(RNase-free)

三、準(zhǔn)備工作
RNase酶非常穩(wěn)定,是導(dǎo)致RNA降解最主要的物質(zhì)。它在一些極端的條件可以暫時失活,但限制因素去除后有迅速復(fù)性。用常規(guī)的高溫高壓蒸氣滅菌方法和蛋白抑制劑都不能是RNase完全失活。它廣泛存在于人的皮膚上,因此,在與RNA制備有關(guān)的分子生物學(xué)實驗時,必須戴手套。
RNase的又一污染源是取液器,根據(jù)取液器制造商的要求對取液器進行處理。一般情況下采用用DEPC配制的70%乙醇擦洗取液器的內(nèi)部和外部,基本達(dá)到要求。取RNase-free的物品時必須戴手套。
1、 料制品的處理 盡可能使用無菌,一次性塑料制品,已標(biāo)明RNase-Free 的塑料制品,如沒有開封使用過通常沒有必要再次處理。對于國產(chǎn)塑料制品,原則上都必須處理方可使用。處理步驟如下:
1)在玻璃燒杯中注入去離子水,加入DEPC使DEPC的終濃度為0.1%。注意:DEPC為劇毒物,活性很強,小心在通風(fēng)柜中使用。

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